CAR-NK細(xì)胞殺傷實驗

        自然殺傷NK細(xì)胞是人體先天免疫（innate immunity）的重要組成部分，該類細(xì)胞可以在不受MHC抗原呈遞限制條件下識別并殺傷被細(xì)菌感染或轉(zhuǎn)化為腫瘤的細(xì)胞，且NK細(xì)胞相對于T細(xì)胞具有更好的臨床安全性。

        費洛斯的CAR-NK細(xì)胞療法平臺從早期靶點抗體序列的發(fā)現(xiàn)到CAR-NK的功能性研究，每一個階段均具有成熟的研發(fā)體系。實驗室配備流式細(xì)胞儀、多功能酶標(biāo)儀等先進(jìn)的儀器設(shè)備，并建立了多種分析檢測實驗平臺，如：LDH法，DELFIA法，熒光霉素報告，Calcein AM染色法應(yīng)對不同項目。

         DELFIA試劑盒檢測靶向人mesothelin的CAR-NK殺傷效果實驗流程

案例展示：anti-MSLN CAR NK細(xì)胞對卵巢癌細(xì)胞SK-OV-3殺傷檢測

1. CAR載體構(gòu)建：將含針對MSLN靶點單鏈抗體的二代經(jīng)典CAR分子構(gòu)建到慢病毒載體中，并包裝得到MSLN-CAR慢病毒。其結(jié)構(gòu)如圖所示。

2. CAR-NK細(xì)胞獲得：在293T中進(jìn)行慢病毒包裝，72h后收取含病毒上清并進(jìn)行滴度檢測，復(fù)蘇我公司自主擴(kuò)增的NK細(xì)胞并活化，病毒轉(zhuǎn)化72h后流式檢測CAR表達(dá)情況

3. 殺傷活性檢測：使用DELFIA方法檢測殺傷，在細(xì)胞培養(yǎng)96孔板中，加入每孔4000個靶細(xì)胞。在根據(jù)不同效靶比加入CAR-NK細(xì)胞共孵育4小時，取上清加入DELFIA檢測底物中，使用時間分辨熒光酶標(biāo)儀進(jìn)行檢測。

4. 計算殺傷活性：以下公式進(jìn)行特異性殺傷計算，圖例

（樣品讀數(shù)-靶細(xì)胞自釋放讀數(shù)）÷（最大釋放讀數(shù)-靶細(xì)胞自釋放讀數(shù)）×100%